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透射电子体视显微镜及超薄切片

发布人:发布时间:2014/9/2

    食用菌和其他微生物一样,也适于使用体视显微镜电镜进行观察研究。食用菌的抱子、子实体、菌丝体及其感病组织,包括病毒颗粒,都可采用电镜,进行超微检验或深人探索。


    超薄切片的基本程序及其原理和光学体视显微镜配套使用的石蜡切片颇为相似.也包括研究材料的固定,脱水,染色,透明,包埋,切片等步骤。不过,具体的试剂和方法需要和电镜的性能相适应。


    首先,将实验材料切成小块,装人离心管内,通过用蒸馏水数次离心洗涤,然后采用适宜的固定液予以固定备用。


    一般是使用四氯化锇固定液。它是一种比较贵重的药物,有0.1g, 0.5g或lg安培瓶三种包装。配制2%四抓化锹溶液,先将棕色清洁的玻瓶,盛人5m1或25m1或50m1的蒸馏水。然后将四氯化锇安培瓶洗净,用玻璃刀锯破,置于蒸馏水中,以玻璃棒击破,摇荡,置通风橱内,并避免直接受光。不可放在冰箱内,以免挥发出来的气体影响其他物品。同时,须用玻瑞瓶储存。因为它能穿透塑料瓶。在使用时,通常用磷酸缓冲液配制四氧化饿固定液。磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L,其pH常为7.0-7.4,加磷酸缓冲液所需要的浓度为1%或2%。由于铁酸需要一些时间才能溶解,所以固定液最少要在使用前1天配制。在室温下,固定液能够保存数星期,最好将其密封,置于暗处。


    脱水(基本上同石蜡切片)故从略。


    包埋:包括渗透和整体包埋。渗透是使渗透量渗透到细胞内部,实际上是对细胞内部的各细胞器或细胞物质进行内部包埋,使细胞内的精细结构在切片时完整无损。而一般所说的包埋是将包埋剂使整体材料小块包埋起来,内外“接轨”,达到包埋的目的,为下一步超薄切片作好准备。


    电子体视显微镜常用的包埋剂主要有三种:环氧树脂、聚脂树脂、甲基苯烯酸醋。由于环氧树脂具有较多优点,故被广泛采用。

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